A、純度要求：樣本中若含有細胞碎片、脂蛋白或其他雜質，會干擾成像。建議通過超速離心法（如100,000g離心純化）或試劑盒進一步純化外泌體513。

B、濃度調整：外泌體懸液濃度建議為5 mg/mL左右，需通過稀釋梯度（如25倍、50倍、100倍、200倍）優化成像效果。濃度過高易導致顆粒堆積，濃度過低則難以捕捉目標結構。

C、樣本保存與處理：

短期保存：4℃保存不超過1～2天，長期保存需分裝后置于-80℃，避免反復凍融導致外泌體破裂。

D、解凍處理：從低溫冰箱取出的樣本需快速冰上溶解并混勻，防止聚集或降解。

2.1 銅網選擇與預處理

A、推薦使用300目碳支持膜銅網，以增強外泌體吸附效果。

B、清洗銅網：負染前需用去離子水（DI水）清洗銅網，去除殘留鹽分（鹽結晶會干擾導電性和成像）。

2.2 樣本滴加技巧

A、用移液槍取5-10 μL樣本滴加至銅網表面，靜置10-15分鐘使外泌體充分吸附。避免滴加過量導致液體溢出或干燥不均。

B、吸干多余液體時，濾紙需從銅網側邊輕觸吸液，避免直接接觸樣本區域。

3.1 染色劑選擇

A、醋酸雙氧鈾（UA）：效果最佳，但具放射性，操作需佩戴防護設備，染色時間控制在1～2分鐘。

B、磷鎢酸（PTA）：更安全環保，但需優化染色時間（0.5-2分鐘）和pH值（6.5-7.0）。

3.2 染色常見問題

A、染色不均：可能因樣本未充分固定。建議先用2%戊二醛固定樣本，再染色。

B、背景過深：染色時間過長或染色劑殘留過多，需縮短染色時間并用濾紙徹底吸干。

4.1 電鏡參數設置

A、加速電壓通常設為80-120 kV，放大倍數建議為50,000-100,000倍，以清晰捕捉30-150 nm的外泌體結構。

B、避免長時間曝光導致樣本損傷，優先使用低劑量模式（Low-dose mode）。

4.2 圖像判讀要點

       多萊泌生物科技（武漢）有限公司坐落于武漢光谷生物城，是一家由外泌體領域權威科學家與資深產業精英攜手創建的企業，已榮獲國家高新技術企業和國家科技型中小企業認定。公司專注于為醫院、高校、科研院所、生物醫藥企業、醫美機構以及膳食公司提供外泌體科研一站式解決方案，目前擁有四大業務板塊，分別為外泌體技術服務、科研試劑、科研設備以及工業原料。 我們愿攜手各界同仁，共同探索生命科學的無限奧秘，一起解泌未來！