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類(lèi)器官與外泌體聯(lián)合研究思路:iPSC衍生的視網(wǎng)膜類(lèi)器官外泌體促進(jìn)角膜上皮傷口愈合

類(lèi)器官具有細(xì)胞和動(dòng)物不具備的優(yōu)勢(shì),近年類(lèi)器官促進(jìn)了疾病、藥物等方面研究發(fā)展,目前類(lèi)器官主要分為組織來(lái)源類(lèi)器官和多能干細(xì)胞來(lái)源類(lèi)器官,類(lèi)器官結(jié)合外泌體又會(huì)碰撞出怎樣的火花呢? 本文對(duì)多能干細(xì)胞來(lái)源的視網(wǎng)膜類(lèi)器官外泌體對(duì)角膜上皮傷口愈合的修復(fù)作用進(jìn)行研究,學(xué)習(xí)類(lèi)器官結(jié)合外泌體研究的思路。

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1

使用iPSC誘導(dǎo)成視網(wǎng)膜類(lèi)器官(RO),提取類(lèi)器官外泌體(Exo-RO

誘導(dǎo)iPSC成RO提取外泌體

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2

Exo-RO能被損傷部位攝取并發(fā)揮損傷修復(fù)作用(組織+細(xì)胞水平)

Figure1:使用calcein標(biāo)記的外泌體處理傷口,觀察傷口部位細(xì)胞攝取Exo-RO情況,結(jié)果顯示外泌體能被攝�。ňG色)。

Figure2:建立小鼠角膜上皮傷口模型,加入Exo-RO治療,觀察12、24、36h時(shí)損傷修復(fù)效果,顯示Exo-RO治療組損傷區(qū)域恢復(fù)更快,傷口變小,由此從組織水平證實(shí)Exo-RO治療角膜損傷修復(fù)效果。

Figure3:通過(guò)Edu染色進(jìn)一步檢測(cè)傷口部位Exo-RO治療后外圍細(xì)胞生長(zhǎng)情況,結(jié)果顯示Exo-RO治療組細(xì)胞生長(zhǎng)分裂較快(紅色標(biāo)記細(xì)胞),由此從細(xì)胞水平進(jìn)一步確認(rèn)Exo-RO治療角膜損傷修復(fù)效果。

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3

Exo-RO治療角膜上皮傷口愈合機(jī)制(分子水平)

Figure4:對(duì)Exo-RO的miRNA進(jìn)行測(cè)序及GSEA分析,檢測(cè)到272個(gè)miRNA,部分miRNA參與免疫調(diào)控,炎癥,表皮細(xì)胞生長(zhǎng)等與角膜傷口愈合息息相關(guān)。

Figure8:對(duì)Exo-RO處理的角膜進(jìn)行測(cè)序,分析差異基因,結(jié)果顯示Exo-RO處理組上調(diào)基因1444個(gè),下調(diào)基因954個(gè),并對(duì)其進(jìn)行GO、KEGG富集分析炎癥、表皮生長(zhǎng)、角膜代謝有關(guān)的通路。

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4

研究思路小結(jié)

該研究先培養(yǎng)iPSC誘導(dǎo)成視網(wǎng)膜類(lèi)器官,提取類(lèi)器官外泌體,并通過(guò)組織+細(xì)胞水平驗(yàn)證外泌體具有角膜上皮損傷修復(fù)的作用,并通過(guò)測(cè)序和生信分析外泌體中miRNA成分以及調(diào)控的角膜細(xì)胞基因表達(dá)分析Exo-RO潛在的作用機(jī)制。全文研究思路簡(jiǎn)單,輕輕松松出成果。

5

一般類(lèi)器官+外泌體合并研究思路

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6
文章信息

Lee S, Han J, Yang J, Lyu J, Park H, Bang J, Kim Y, Chang H, Park T. Exosomes from Human iPSC-Derived Retinal Organoids Enhance Corneal Epithelial Wound Healing. Int J Mol Sci. 2024 Aug 16;25(16):8925. doi: 10.3390/ijms25168925. PMID: 39201611; PMCID: PMC11354741.


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